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捕獲包被法檢測抗體和捕獲包被法檢測抗體
發(fā)布時(shí)間： 2019-08-02 點(diǎn)擊次數(shù)： 2566次捕獲包被法檢測抗體
捕獲包被法（亦稱反向間接法）ELISA，首要用于血清中某種抗體亞型成分（如IgM）的測定。以目前常用的IgM測定為例，因血清中針對(duì)某種抗原的特異性IgM和IgG同時(shí)存在，則后者可攪擾IgM的測定。因此先將一切血清IgM（包括異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，在去除IgG后再測定特異性IgM。IgM抗體的檢測用于流行癥的前期確診中。先用抗人IgM抗體包被固相，以捕獲血清標(biāo)本中的IgM（其間包括針對(duì)抗原的特異性IgM抗體和非特異性的IgM）。然后參加抗原，此抗原僅與特異性IgM相結(jié)合。繼而加酶符號(hào)針對(duì)抗原的特異性抗體。再與底物作用，呈色即與標(biāo)本中的IgM成正相關(guān)。此法常用于病毒性感染的前期確診。類風(fēng)濕因子（RF）相同能攪擾捕獲包被法測定IgM抗體，導(dǎo)致假陽性反響。因此中和IgG的間接法近來頗受喜愛，用這類試劑檢測抗CMV IgGM和抗弓形蟲IgM抗體已獲成功。
捕獲法測抗體的扼要操作過程：
1）特異性捕獲抗體的包被，先把能特異性結(jié)合待測抗原的抗體固定于固相載體外表；
2）參加待測樣品，通過固定在載體外表的針對(duì)該抗原的抗體固定于載體外表；
3）參加特異性抗原以及針對(duì)該特異性抗原的酶標(biāo)抗體；
4）參加酶促反響底物，發(fā)作顯色反響，顯色的深淺與待測抗體的量成正比。
捕獲包被法檢測抗體
近年在親和素-生物素體系上又發(fā)展出ABS-ELISA法 。親和素是一種糖蛋白，每個(gè)分子由4個(gè)能和生物素結(jié)合的亞基組成，生物素為小分子化合物。用化學(xué)辦法制成的衍生物素-羥基琥珀酰亞胺酯可與抗體或酶構(gòu)成生物素符號(hào)產(chǎn)品，符號(hào)辦法頗為簡潔，并且不影響抗體或酶原有的生物學(xué)活性。親和素生物素體系，簡稱ABS（avidin-biotin system）。因?yàn)橛H和素與生物素間的親和力*，結(jié)合迅速，且安穩(wěn)，使BAS符號(hào)技能比慣例酶聯(lián)免疫、放射免疫及熒光免疫技能有著更高的靈敏度，為微量抗原、抗體的檢測拓荒了新的途徑，大大提高了檢測的靈敏度，但該辦法比一般ELISA多用了兩種試劑，增加了操作過程，因此在臨床查驗(yàn)中ABS-ELISA使用不多。ABS-ELISA法可分為酶符號(hào)親和素-生物素（LAB）法和橋聯(lián)親和素-生物素（ABC）法兩種類型。兩者均以生物素符號(hào)的抗體（或抗原）代替原ELISA體系中的酶標(biāo)抗體（抗原）。
在LAB法中，將特異性抗體生物素化、酶分子符號(hào)在親和素分子上，生物素化抗體與被檢抗原結(jié)合后，再借BAS的高度親和力將酶分子聯(lián)結(jié)到抗原分子上，經(jīng)酶促反響即可檢出抗原，因此提高檢測的敏感度。
ABC法相同將特異性抗體生物素化、酶分子標(biāo)在生物素上，親和素和酶標(biāo)生物素需要先按必定比例構(gòu)成ABC復(fù)合物，這種網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)結(jié)合了很多的酶分子，當(dāng)親和素尚未被酶標(biāo)生物素飽滿時(shí)，生物素化抗體即可與之結(jié)合, 使被檢抗原、生物素化抗體和酶標(biāo)生物素聯(lián)成一體。