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ELISA試劑盒顯色反響應(yīng)避光運(yùn)用
發(fā)布時(shí)間： 2017-02-13 點(diǎn)擊次數(shù)： 2150次這類反響的定性成果可以用肉眼判別。ELISA試劑盒目視標(biāo)本也無(wú)色或近于無(wú)色者判為陰性，顯色明晰者為陽(yáng)性。但在ELSIA試劑盒中，正常人血清反響后常可呈現(xiàn)呈色的本底，此本底的深淺因ELISA試劑盒的構(gòu)成和試驗(yàn)的條件不一樣而異，因而試驗(yàn)中有必要加測(cè)陰性對(duì)照。陰性對(duì)照的構(gòu)成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物(見3.6)。在用肉眼判別成果時(shí)，更宜用顯色深于陰性對(duì)照作為標(biāo)本陽(yáng)性的指標(biāo)。此刻酶催化無(wú)色的底物生成有色的產(chǎn)品。反響的溫度和時(shí)刻仍是影響顯色的要素。在必定時(shí)刻內(nèi)，陰性孔可堅(jiān)持無(wú)色，而陽(yáng)性孔則隨時(shí)刻的延伸而呈色加強(qiáng)。恰當(dāng)提高溫度有助于加快顯色進(jìn)行。在定量測(cè)定中，參加底物后的反響溫度和時(shí)刻應(yīng)按規(guī)則力求。ELISA試劑盒定性測(cè)定的顯色可在室溫進(jìn)行，時(shí)刻通常不需要嚴(yán)格控制，有時(shí)可根據(jù)陽(yáng)性對(duì)照孔和陰性對(duì)照孔的顯況恰當(dāng)縮短或延伸反響時(shí)刻，及時(shí)判別。
OPD底物顯色通常在室外溫或37℃反響20-30分鐘后即不再加深，ELISA試劑盒再延伸反響時(shí)刻，可使本底值增高。OPD底物液受光照會(huì)自行變色，顯色反響結(jié)束時(shí)參加停止液停止反響。OPD產(chǎn)品用硫酸停止后，顯色由橙轉(zhuǎn)向棕。
TMB受光照的影響不大，ELISA試劑盒可在室溫中置于操作臺(tái)上，邊反響調(diào)查成果。但為確保試驗(yàn)成果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)則的恰當(dāng)時(shí)刻閱覽成果。TMB經(jīng)HRP作用后，約40分鐘顯色達(dá)，隨即逐步削弱，ELISA試劑盒至2小時(shí)后即可*衰退至無(wú)色。TMB的停止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反響停止。這類停止劑尚能使藍(lán)色維持較長(zhǎng)時(shí)刻(12-24小時(shí))不褪，是目視判別的杰出停止劑。此外，各類酸性停止液則會(huì)使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成，此刻可用特定的波長(zhǎng)(450nm)測(cè)讀吸光值。